关于细胞因子溶解和保存的注意事项

关于细胞因子相关产品基础参数的常见问题

Q：细胞因子（重组蛋白）都是冻干粉的吗？
A：乔默生物提供的细胞因子（重组蛋白）都是冻干粉形式，这样更利于产品的运输和稳定。

Q：细胞因子（重组蛋白）需要灭菌么？
A：细胞因子（重组蛋白）都是在过滤除菌后再装瓶的。只需按说明书要求用无菌水或灭菌的缓冲液溶解即可。

Q：ED₅₀ 和 units/mg 怎么换算？
A：ED₅₀（半数有效浓度），定义为达到最大反应活性的 50% 时细胞因子的浓度。各公司 ED50 的测试实验各不相同。将 ED50（ng/ml）转化为比活力 units/mg 的公式为



Note：这里的 units 不是 IU （国际单位）
(乔默采用国际单位 IU，计算采用经验证的分析方法进行测定，同时采用世界卫生组织（WHO）制定的内部标准并排测试。然后将该细胞因子的活性标准化为标准的活性水平。)

Q：细胞因子（重组蛋白）的交叉活性如何比对？
A：Blast 工具网址 ：http://www.ebi.ac.uk/blastall/

从乔默产品说明书上「蛋白序列」项找到该蛋白的氨基酸序列，粘贴到比对框中，点击「Submit」 开始比对；根据结果的 Identity%，判断所需种属的交叉反应性（一般 85% 以上认为理论上有交叉活性）。

Q：什么是无动物源成分（Animal-free）的重组蛋白？
A：乔默生物提供的重组蛋白均为 Animal-free 级别，这里的 Animal-free 指的是在表达蛋白的过程中未利用任何动物来源的材料。我们的重组蛋白一般是大肠杆菌表达的，而大肠杆菌表达的培养基中需要添加胰蛋白胨等动物来源的组分，这些动物源成分的异源蛋白在后续可能会引发人和动物的异体排斥或者过敏反应。

乔默生物无动物成分重组蛋白均在独立的无动物成分的生产车间中生产，生产过程中不使用含胰蛋白胨等动物源成分的培养基或试剂。

 

关于产品溶解和存储的问题

Q：细胞因子（重组蛋白）如何溶解和分装储存？
A：乔默生物细胞因子（重组蛋白）均为冻干粉，客户收到产品后我们承诺 -20℃~-80℃ 可保存一年。(当然如果保存方式得当，是可以保存数年的。)
收到产品后，强烈建议在开盖前先进行离心，以便使可能因运输脱落粘附在管盖或管壁上的蛋白聚集于管底。

1．离心：低速离心 (3000-3500 rpm) 5 分钟。
2．溶解（请按照以下两步进行正确充分的溶解）：
第一步：用说明书上指定溶液进行溶解，溶解浓度控制在 0.1-1.0 mg/ml。溶解时不可涡旋震荡，剧烈震荡会导致其化学键的断裂，从而造成蛋白失活。为保证实现细胞因子或重组蛋白的完全溶解，可在加入适当的溶液后轻摇或用移液枪的枪头轻吹几下，并室温静置 20min 左右，待细胞因子完全溶解后使用。
第二步：稀释：冻干粉蛋白溶解后可根据自己的后续实验需要进一步稀释，稀释可用培养基或 PBS 等溶液，其中需务必含有载体蛋白如 BSA、FBS、HSA 或海藻糖等。
3．分装和储存：分装时每管中工作液的体积最好是一次实验的用量，分装的体积最好大于 20ul，避免吸附带来的蛋白损失。避免反复冻融引起蛋白活性的降低。任何一次冻融循环都会引起蛋白活性的降低。
*蛋白初步溶解后在 4℃ 可保存 1 周；如需长期保存，则需加入含载体蛋白的溶液进行进一步稀释后再分装冻存于 -20℃~-80℃，可保存 3-6 个月。

Q：重悬后高于或低于该浓度范围可以吗？
A：不建议。过高或过低的浓度会导致细胞因子或蛋白不稳定，即很容易出现活性下降的现象。高于这个浓度范围，可能会超过该蛋白的最大溶解浓度，加入的溶液无法完全溶解蛋白，影响后续蛋白活性。此外，高于或低于该浓度范围，蛋白都可能会出现聚集，最终结果还是部分蛋白未溶解，导致蛋白活性的减弱。

Q：载体蛋白有哪些？
A：0.1%BSA，10%FBS (胎牛血清)，5%HSA (人血清白蛋白)，5% 海藻糖，四者选其一。无血清实验培养时，建议选择 5% 海藻糖。

Q：含载体蛋白的溶液指的是什么溶液呢？水可以吗？
A：为了维持一定的 pH 值跟盐类浓度，避免蛋白不稳定，不建议用水，该溶液通常建议选择 pH 近中性、有一定缓冲能力的缓冲液，如 PBS、培养基（ RPMI1640, DMEM 等）等。

Q：有人会在细胞因子或重组蛋白冻干粉用推荐溶液重悬后直接分装冻存于 -20℃ 至 -80℃，这样可以吗？
A：不可以。塑料管壁对多数蛋白均有很好的吸附作用，也就是说溶液中的蛋白很容易粘附在管壁。粘附后，蛋白是很难与管壁分离的。我们所熟悉的 ELISA 实验中包被抗体/抗原就是通过这种粘附作用包被到酶标板上的。

载体蛋白，如 0.1% BSA、10% FBS、5% HSA 和 5% 海藻糖的主要作用是封闭塑料管壁上的蛋白结合位点，使细胞因子或重组蛋白不会粘附于管壁。如果在细胞因子或重组蛋白冻干粉用推荐溶液重悬后，不用含载体蛋白的溶液进一步稀释，而是直接分装冻存，则溶液中的大部分细胞因子或重组蛋白均会粘附到管壁上，导致溶液中实际溶解的细胞因子或重组蛋白的浓度大大降低，最终表现为细胞因子或重组蛋白活性的下降。此外，载体蛋白也能维持蛋白在低温条件下的稳定，使其保持活性。

因此，在分装冻存前，一定要用含载体蛋白的溶液将重悬液进一步稀释。

关于产品实验应用的问题
Q：细胞因子（重组蛋白）使用推荐浓度？
A：不同细胞因子（重组蛋白）用于不同的实验，所使用的的剂量会有所不同，所以说明书上一般不会如抗体使用说明书一样列出推荐剂量，建议客户参考相关文献，选择和摸索合适的使用浓度。

Q：细胞因子（重组蛋白）能否用于体内实验？
A：理论上，只要不含叠氮钠，都是可以用于体内的。用量需要参考相关文献。