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乔默生物技术（上海）有限公司品牌商
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新冠蛋白SARS-CoV-2 Nucleocapsid Protein (Omicron B1.1.529 Variant), Tag Free, HEK293
品牌：Chamot Biotech/乔默生物
￥5400
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公司新闻/正文
小鼠 Th 亚群分化方案
528 人阅读发布时间：2023-10-07 10:47
小鼠 Th 细胞亚群分化方案
准备培养基：1640 培养基，胎牛血清，双抗，L-谷氨酰胺，β-巯基乙醇
培养基配置：RPMI-1640 + 10% 胎牛血清 + 1 mM L-谷氨酰胺 + 55 μM β-巯基乙醇+双抗
准备细胞：分选出 Naive CD4+ T cells (CD4+CD25-CD44lowCD62Lhigh)
细胞刺激培养：
1、CD3 包板：包板浓度 2 μg/ml（96 孔板加 50μl，48 孔板加 200μl）
加入上述体积后 4℃ 过夜包被，包被后弃去孔内液体，PBS 洗板 2 次
2、分选的 Naive CD4+ T cells 加入包被孔内，
a) 96 孔板加入 1*105 细胞（200μl 培养体系）
b) 48 孔板加入 2*105 细胞（500μl 培养体系）
3、配置分化培养基（1μg/ml anti-mouse CD28）
按需要分化的方向加入以下分化条件的培养基：
a) Th0: no cytokines/antibodies +20 ng/mL IL-2
b) Th1: 20 ng/ml IL-12+20 ng/ml IL-2; plus 10 µg/mL anti-mouse IL-4
c) Th2: 10 ng/ml IL-4+20 ng/ml IL-2; plus 10 µg/mL anti-mouse IFN-γ
d) Th17: 5 ng/ml TGF-β1, 20 ng/ml IL-6, 10 ng/ml IL-23; plus 10 µg/mL anti-mouse IFN-γ, 10 µg/mL anti-mouse IL-4
e) Tfh: 20 ng/ml IL-6, 20 ng/IL-21; plus 10 µg/mL anti-mouse IFN-γ, 10 µg/mL anti-mouse IL-4 & anti-mouse TGF-β1
f) Treg: 20 ng/ml IL-2+5 ng/ml TGF-β1, 10 µg/mL anti-mouse IL-4 & anti-mouse IFN-γ
4、细胞培养分化 3-5 天，培养过程中若培养液上清变黄，更换培养基，一般建议半量换液，根据培养经验，一般是隔天换液。
5、培养分化后鉴定（胞内染色）：分化后的细胞加入 20 ng/ml PMA , 1 μg/ml Ionomycin 刺激 30 min 后，加入 10 μg/ml BFA 阻断，继续培养 3.5 h 后收集细胞进行流式检测。
6.6、细胞鉴定：购买相应的流式抗体及辅助试剂进行胞内染色鉴定。
相关细胞因子推荐
乔默生物提供一系列Th分化相关细胞因子产品，高纯度、高活性、低内毒素、无动物源成分，现货供应，助力研究工作。
准备培养基：1640 培养基，胎牛血清，双抗，L-谷氨酰胺，β-巯基乙醇
培养基配置：RPMI-1640 + 10% 胎牛血清 + 1 mM L-谷氨酰胺 + 55 μM β-巯基乙醇+双抗
准备细胞：分选出 Naive CD4+ T cells (CD4+CD25-CD44lowCD62Lhigh)
细胞刺激培养：
1、CD3 包板：包板浓度 2 μg/ml（96 孔板加 50μl，48 孔板加 200μl）
加入上述体积后 4℃ 过夜包被，包被后弃去孔内液体，PBS 洗板 2 次
2、分选的 Naive CD4+ T cells 加入包被孔内，
a) 96 孔板加入 1*105 细胞（200μl 培养体系）
b) 48 孔板加入 2*105 细胞（500μl 培养体系）
3、配置分化培养基（1μg/ml anti-mouse CD28）
按需要分化的方向加入以下分化条件的培养基：
a) Th0: no cytokines/antibodies +20 ng/mL IL-2
b) Th1: 20 ng/ml IL-12+20 ng/ml IL-2; plus 10 µg/mL anti-mouse IL-4
c) Th2: 10 ng/ml IL-4+20 ng/ml IL-2; plus 10 µg/mL anti-mouse IFN-γ
d) Th17: 5 ng/ml TGF-β1, 20 ng/ml IL-6, 10 ng/ml IL-23; plus 10 µg/mL anti-mouse IFN-γ, 10 µg/mL anti-mouse IL-4
e) Tfh: 20 ng/ml IL-6, 20 ng/IL-21; plus 10 µg/mL anti-mouse IFN-γ, 10 µg/mL anti-mouse IL-4 & anti-mouse TGF-β1
f) Treg: 20 ng/ml IL-2+5 ng/ml TGF-β1, 10 µg/mL anti-mouse IL-4 & anti-mouse IFN-γ
4、细胞培养分化 3-5 天，培养过程中若培养液上清变黄，更换培养基，一般建议半量换液，根据培养经验，一般是隔天换液。
5、培养分化后鉴定（胞内染色）：分化后的细胞加入 20 ng/ml PMA , 1 μg/ml Ionomycin 刺激 30 min 后，加入 10 μg/ml BFA 阻断，继续培养 3.5 h 后收集细胞进行流式检测。
6.6、细胞鉴定：购买相应的流式抗体及辅助试剂进行胞内染色鉴定。
相关细胞因子推荐
乔默生物提供一系列Th分化相关细胞因子产品，高纯度、高活性、低内毒素、无动物源成分，现货供应，助力研究工作。
| 生产商 | 产品编号 | 产品名称 | 产品规格 |
| Chamot | CM003-MP | Recombinant IL-2，Mouse，AF | 5μg/20μg/100μg/500μg/1mg |
| Chamot | CM005-MP | Recombinant IL-4，Mouse，AF | 5μg/20μg/100μg/500μg/1mg |
| Chamot | CM007-MP | Recombinant IL-6，Mouse，AF | 5μg/20μg/100μg/500μg/1mg |
| Chamot | CM011-MP | Recombinant IL-12 p35，Mouse，AF | 5μg/20μg/100μg/500μg/1mg |
| Chamot | CM012-MP | Recombinant IL-12 p40，Mouse，AF | 5μg/20μg/100μg/500μg/1mg |
| Chamot | CM018-MP | Recombinant IL-21，Mouse，AF | 5μg/20μg/100μg/500μg/1mg |
| Chamot | CM057-MP | Recombinant TGF beta 1，Mouse，AF | 5μg/20μg/100μg/500μg/1mg |