2025诺贝生理学或医学奖相关的调节性T细胞怎么养？

当地时间10月6日，瑞典卡罗琳医学院宣布，将2025年诺贝尔生理学或医学奖授予科学家玛丽·E·布伦科（Mary E. Brunkow）、弗雷德·拉姆斯德尔（Fred Ramsdell）和坂口志文（Shimon Sakaguchi），表彰他们在外周免疫耐受机制方面的研究贡献。

 

 

 

坂口志文于 1995 年发现了调节性 T 细胞（Regulatory T cells, Treg），它可以有效阻止免疫系统攻击人体自身。布伦科和拉姆斯德尔则在 2001 年找到了与之相关的基因 Foxp3，他们发现该基因的突变会导致调节性 T 细胞功能缺陷，进而引发严重的自身免疫反应。2003 年，坂口志文将这两项发现联系起来，证明 Foxp3 是调节性 T 细胞发育与功能的主控基因。

这些成果加深了科学界对免疫系统如何运作的理解，推动了自身免疫性疾病、癌症等方面的研究，基于调节性 T 细胞的疗法正被积极探索用于治疗多种疾病。

 

如何体外培养调节性T细胞？

准备工作：

·  基础培养基配置：RPMI-1640培养基 + 10% 胎牛血清 + 1mM L-谷氨酰胺 + 55 μM β-巯基乙醇+双抗。

·  准备细胞：从外周血或脾脏中获得分选获取Naive CD4⁺ T cells (CD4⁺CD25^-CD44^lowCD62L^high)。

调节性T细胞培养：

1. CD3包板：包板浓度2 μg/mL（96孔板加50 μl，48孔板加200 μl）

加入上述体积后4度过夜包被，包被后弃去孔内液体，PBS洗板2次。

2. 分选的Naive CD4⁺ T cells加入包被孔内，

a) 96孔板加入1*10⁵细胞（200μl培养体系）

b) 48孔板加入2*10⁵细胞（500μl培养体系）

3. 配置分化培养基

Human:

anti-human CD28 (4 μg/mL) + Human IL-2(10 ng/mL) + Human TGF-β1 (10 ng/mL) + anti-human IFN-γ (10 µg/mL) + anti-human IL-4 (10 µg/mL)

Mouse:

anti-mouse CD28 (1 μg/mL)+ Mouse IL-2 (20 ng/mL) + Mouse TGF-β1 (5 ng/mL) + anti-mouse IL-4(10 µg/mL) + anti-mouse IFN-γ (10 µg/mL )

4. 细胞培养分化3-5天，培养过程中若培养液上清变黄，更换培养基，一般建议半量换液，根据培养经验，一般是隔天换液。

5. 培养分化后鉴定（胞内染色）：分化后的细胞加入20 ng/mL PMA , 1 μg/mL Ionomycin刺激30 min后，加入10 μg/mL BFA阻断，继续培养3.5 h后收集细胞进行流式检测。

6. 细胞鉴定：购买相应的流式抗体及辅助试剂进行胞内染色鉴定（CD25⁺Foxp3⁺）。

 

*以上方案供参考，具体实验请根据实际情况做对应调整。

 

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