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品牌：Chamot Biotech/乔默生物
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小鼠脾脏 T 细胞的扩增方案
802 人阅读发布时间：2023-10-25 15:25
1. 用 PBS 稀释配置 anti-CD3 功能性抗体并铺板，浓度为 1-5ug/ml。根据需要选择并计算所需抗体的量。以 96 孔板为例，每孔加入 50ul（6 孔板 500ul）。37℃2 h 或者 4℃ 过夜（过夜包被效果比较好）。
2. 加入细胞前吸去孔内抗体溶液，加入 200ul（6 孔板 2 ml）PBS 洗涤 2 次，去除未结合抗体。
3. 研磨小鼠脾脏，PBS 洗涤细胞 1 次，离心后的沉淀弹散，加入 2 ml 红细胞裂解液 (1X)，室温裂解 5 min，用完全培养基洗涤细胞一次。
4. 用含有 anti-CD28（1-2ug/ml）以及 IL-2（10-50ng/ml）的完全培养基重悬细胞，加入 96 孔板（或 6 孔板内）。（96 孔板加入 3×105 细胞，6 孔板加入 2-5×106 细胞）
5. 培养过程中隔天换液，进行细胞计数并观察细胞状态。
2. 加入细胞前吸去孔内抗体溶液，加入 200ul（6 孔板 2 ml）PBS 洗涤 2 次，去除未结合抗体。
3. 研磨小鼠脾脏，PBS 洗涤细胞 1 次，离心后的沉淀弹散，加入 2 ml 红细胞裂解液 (1X)，室温裂解 5 min，用完全培养基洗涤细胞一次。
4. 用含有 anti-CD28（1-2ug/ml）以及 IL-2（10-50ng/ml）的完全培养基重悬细胞，加入 96 孔板（或 6 孔板内）。（96 孔板加入 3×105 细胞，6 孔板加入 2-5×106 细胞）
5. 培养过程中隔天换液，进行细胞计数并观察细胞状态。
说明：以上 CD3 和 CD28 抗体的浓度，可根据自己的需求进行选择，如果培养时间短，希望有很强的活化作用可以适当提高浓度，反之，可降低浓度。虽然高浓度诱导活化能力强，但其诱导凋亡的作用也很明显。
实验所需试剂：
| 货号 | 产品名称 | 规格 | 目录价 | 优惠价 |
| CM003-5MP | Recombinant IL-2，Mouse，AF | 5 μg | ￥600.00 | ￥299.00 |
| CM003-20MP | Recombinant IL-2，Mouse，AF | 20 μg | ￥1,500.00 | ￥999.00 |
| CM004-100MP | Recombinant IL-2，Mouse，AF | 100 μg | ￥4,500.00 | |
| CM004-500MP | Recombinant IL-2，Mouse，AF | 500 μg | ￥13000.00 | |
| CM004-1000MP | Recombinant IL-2，Mouse，AF | 1 mg | ￥20000.00 |