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品牌：Chamot Biotech/乔默生物
￥5400
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人CIK细胞培养方案
347 人阅读发布时间：2023-11-16 09:17
背景概述
近几年，生物细胞疗法作为生物治疗领域重要的方法之一得到蓬勃发展。细胞治疗包括细胞性肿瘤疫苗和过继性细胞治疗。其中过继性细胞治疗即是通过分离自体或异体的免疫效应细胞，经体外激活并回输，直接杀伤肿瘤细胞或激活机体的抗肿瘤免疫反应，从而达到控制肿瘤复发和转移的目的，实现延长肿瘤患者的生存期、提供患者生活质量的多种目标。
细胞因子诱导的杀伤细胞（CIK）细胞疗法技术是开展较早的过继性细胞疗法之一，可用于治疗多种实体瘤和血液系统恶性肿瘤，如肝癌、胃癌、肾癌等。CIK细胞治疗其应用通常是通过采集患者外周血，体外扩增CIK细胞，再将其通过输注等方式给予患者进行治疗。
CIK细胞增殖能力强，细胞毒作用强，具有一定的免疫特性，且兼具有T淋巴细胞强大的抗瘤活性，和NK细胞的非MHC限制性杀瘤优点。该细胞对肿瘤细胞的识别能力很强，能精确命中肿瘤细胞，但不会伤及“无辜”的正常细胞。尤其对手术后或放化疗后患者效果显著，能消除残留微小的转移病灶，防止癌细胞扩散和复发，提高机体免疫力。因此，CIK细胞被认为是新一代的肿瘤过继细胞免疫治疗的shouxuan方案。
人CIK细胞培养方案（仅供参考）
1．外周血单个核细胞的采集
1.1 用血细胞分离机采集患者自身的外周血单个核细胞50-100mL。
1.2 淋巴细胞分离液密度梯度离心法进一步纯化单个核细胞(PBMC)。
1.3 无血清培养基洗涤2次，获得纯度在90%以上的PBMC。
2．CIK细胞的培养及鉴定
2.1 将PBMC按1-2×106/ml的浓度悬浮于无血清培养基中，加入1000 U/ml的重组人IFN-γ，37℃，5%CO2培养箱中培养。
2.2 24h后加入50ng/ml的CD3单克隆抗体和300 U/ml的重组人IL-2，刺激CIK细胞的生长和增殖。
注：此时也可同时加入100 U/ml的重组人IL-1α。
2.3 每3天半量换液或扩瓶一次，并补加重组人IL-2 300 U/ml。
2.4 在培养的第14d，收获CIK细胞。
2.5 CIK细胞质控：
2.5.1 台盼蓝染色检测：活细胞应在80%以上；
2.5.2 流式细胞仪检测细胞表面CD3、CD8、CD56等分子的表达：CD3+CD56+细胞的比例应在20%以上。
2.5.3 细胞杀伤实验：以CIK细胞为效应细胞，以肿瘤细胞(可为原代肿瘤细胞或肿瘤细胞株)为靶细胞，将效应细胞与靶细胞按10:1(数目比)的比例加入96孔U型板中，每孔含靶细胞1 x 104个，终体积为200μl，设3个复孔。培养4h，然后取培养上清，用乳酸脱氢酶(LDH)试剂盒检测效应细胞对靶细胞的杀伤率。
2.5.4 收获细胞前，取少量培养物进行细菌、真菌培养，并检测支原体、衣原体，及内毒素(标准：病原学检测阴性，内毒素<5 EU/mL)。
CIK细胞培养所需细胞因子：
参考文献：
Li R, Wang C, et al. Autologous cytokine-induced killer cell immunotherapy in lung cancer: a phase II clinical study. Cancer Immunol Immunother. 2012; 61:2125–2133.
近几年，生物细胞疗法作为生物治疗领域重要的方法之一得到蓬勃发展。细胞治疗包括细胞性肿瘤疫苗和过继性细胞治疗。其中过继性细胞治疗即是通过分离自体或异体的免疫效应细胞，经体外激活并回输，直接杀伤肿瘤细胞或激活机体的抗肿瘤免疫反应，从而达到控制肿瘤复发和转移的目的，实现延长肿瘤患者的生存期、提供患者生活质量的多种目标。
细胞因子诱导的杀伤细胞（CIK）细胞疗法技术是开展较早的过继性细胞疗法之一，可用于治疗多种实体瘤和血液系统恶性肿瘤，如肝癌、胃癌、肾癌等。CIK细胞治疗其应用通常是通过采集患者外周血，体外扩增CIK细胞，再将其通过输注等方式给予患者进行治疗。
CIK细胞增殖能力强，细胞毒作用强，具有一定的免疫特性，且兼具有T淋巴细胞强大的抗瘤活性，和NK细胞的非MHC限制性杀瘤优点。该细胞对肿瘤细胞的识别能力很强，能精确命中肿瘤细胞，但不会伤及“无辜”的正常细胞。尤其对手术后或放化疗后患者效果显著，能消除残留微小的转移病灶，防止癌细胞扩散和复发，提高机体免疫力。因此，CIK细胞被认为是新一代的肿瘤过继细胞免疫治疗的shouxuan方案。
源自:Ying Zhang,etc.Cancers (Basel). 2020 Sep 1;12(9):2471.
人CIK细胞培养方案（仅供参考）
1．外周血单个核细胞的采集
1.1 用血细胞分离机采集患者自身的外周血单个核细胞50-100mL。
1.2 淋巴细胞分离液密度梯度离心法进一步纯化单个核细胞(PBMC)。
1.3 无血清培养基洗涤2次，获得纯度在90%以上的PBMC。
2．CIK细胞的培养及鉴定
2.1 将PBMC按1-2×106/ml的浓度悬浮于无血清培养基中，加入1000 U/ml的重组人IFN-γ，37℃，5%CO2培养箱中培养。
2.2 24h后加入50ng/ml的CD3单克隆抗体和300 U/ml的重组人IL-2，刺激CIK细胞的生长和增殖。
注：此时也可同时加入100 U/ml的重组人IL-1α。
2.3 每3天半量换液或扩瓶一次，并补加重组人IL-2 300 U/ml。
2.4 在培养的第14d，收获CIK细胞。
2.5 CIK细胞质控：
2.5.1 台盼蓝染色检测：活细胞应在80%以上；
2.5.2 流式细胞仪检测细胞表面CD3、CD8、CD56等分子的表达：CD3+CD56+细胞的比例应在20%以上。
2.5.3 细胞杀伤实验：以CIK细胞为效应细胞，以肿瘤细胞(可为原代肿瘤细胞或肿瘤细胞株)为靶细胞，将效应细胞与靶细胞按10:1(数目比)的比例加入96孔U型板中，每孔含靶细胞1 x 104个，终体积为200μl，设3个复孔。培养4h，然后取培养上清，用乳酸脱氢酶(LDH)试剂盒检测效应细胞对靶细胞的杀伤率。
2.5.4 收获细胞前，取少量培养物进行细菌、真菌培养，并检测支原体、衣原体，及内毒素(标准：病原学检测阴性，内毒素<5 EU/mL)。
CIK细胞培养所需细胞因子：
| 品牌 | 产品编号 | 产品名称 | 规格 | 目录价 | 特价优惠 |
| Chamot | CM004-20HP | Recombinant IL-2，Human，AF | 20 μg | ￥600 | ￥299 |
| Chamot | CM004-100HP | Recombinant IL-2，Human，AF | 100 μg | ￥1,500 | ￥999 |
| Chamot | CM004-500HP | Recombinant IL-2，Human，AF | 500 μg | ￥4,500 | |
| Chamot | CM004-1000HP | Recombinant IL-2，Human，AF | 1 mg | ￥7,000 | |
| Chamot | CM001-5HP | Recombinant IL-1 alpha，Human，AF | 5 μg | ￥600 | ￥299 |
| Chamot | CM001-20HP | Recombinant IL-1 alpha，Human，AF | 20 μg | ￥1,500 | ￥999 |
| Chamot | CM001-100HP | Recombinant IL-1 alpha，Human，AF | 100 μg | ￥4,500 | |
| Chamot | CM001-500HP | Recombinant IL-1 alpha，Human，AF | 500 μg | ￥13,000 | |
| Chamot | CM001-1000HP | Recombinant IL-1 alpha，Human，AF | 1 mg | ￥20,000 | |
| Chamot | CM081-20HP | Recombinant IFN gamma，Human，AF | 20 μg | ￥600 | ￥299 |
| Chamot | CM081-100HP | Recombinant IFN gamma，Human，AF | 100 μg | ￥1,500 | ￥999 |
| Chamot | CM081-500HP | Recombinant IFN gamma，Human，AF | 500 μg | ￥4,500 | |
| Chamot | CM081-1000HP | Recombinant IFN gamma，Human，AF | 1 mg | ￥7,000 |
参考文献：
Li R, Wang C, et al. Autologous cytokine-induced killer cell immunotherapy in lung cancer: a phase II clinical study. Cancer Immunol Immunother. 2012; 61:2125–2133.